Benutzeranleitung / Produktwartung SP HP des Produzenten GE
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Instructions 71-7149-00 AN HiTrap ion exchange columns GE Healthcare HiTrap SP HP , 1 ml and 5 ml HiTrap Q HP , 1 ml and 5 ml HiT rap ™ SP HP an d Hi T rap Q HP a re pre pac ked , rea dy to us e cat.
p. 2 Code No. Designation No. su pplied 17 - 1151 - 01 Hi T rap S P HP 5 x 1 ml 17 - 1152-01 HiTrap SP HP 5 x 5 m l 17 - 1153- 01 Hi T rap Q H P 5 x 1 ml 17 - 1154 -01 Hi T rap Q H P 5 x 5 ml Connectorkit Connectors supplied Usage No.
p. 3 1. Description Media properties SP Seph arose ™ H igh P er for ma nce an d Q Sep ha rose H igh P er fo rma nce are s tr ong ca ti on an d st ron g ani on ex cha nge rs re sp ec tiv ely . Bot h rem ain cha rge d and m ain tai n high c apa cit y over b roa d pH ra nge s.
p. 4 Ta b l e 1 . Hi T r ap SP HP a nd Hi T rap Q HP c olu mns c hara ct eri st ic s Co lum n vol ume s 1 ml o r 5 ml Co lum n dim ens io ns 0.7 × 2.5 c m (1 ml ) and 1 .6 × 2.5 c m (5 m l) T ota l ion ic ca pac ity 0.14– 0.20 m mo l (C l – )/m l me di um (Q) 0.
p. 5 2. Selection of ion exchanger and conditions Io n exch ang e chr oma tog rap hy is b ase d on a dso rpt io n and re ver sib le bi ndi ng of ch arg ed sa mpl e mo lec ule s to op pos ite ly ch arg ed gro ups at ta che d to an in so lub le ma tr ix .
p. 6 Strategy 1. Binding and elution of all sample components Bi ndi ng is a chi eved b y cho os ing a s tar t b uf fe r wit h a lo w pH for H iTrap SP HP or a h igh p H for Hi Trap Q HP . T he io nic s tre ngh t sho uld b e kep t as lo w as po ssi bl e to all ow al l com po nent s to b in d to th e ion ic ex chan ge (< 5 mS/cm ) .
p. 7 Th e buf fe ri ng io n sho uld c arr y th e sam e cha rge a s the i on ex cha nge g rou p an d sho uld h ave a pK a wit hin 0 .5 pH u nit s of t he pH u se d in th e sep ara ti on. Bu f feri ng io ns of o pp osi te cha rge m ay ta ke pa r t in th e ion e xch ang e pro ces s and caus e local distu rbance s in pH.
p. 8 Ta b l e 3 . Buf fers for anion exchange chromatography. pH in ter va l Sub st anc e Co nc . (mM ) Co unte r-io n pK a (25 ° C ) 1 4.3–5.3 N-Methylpiperazine 20 Cl - 4. 75 4.8–5.8 Piperazine 20 Cl - or HC OO - 5.33 5. 5– 6.5 L-His ti din e 20 Cl - 6.
p. 9 Fig 3. Recommended buffer substances for anion exchange chromatography. Th e colu mn s can be o pe rate d wi th a sy rin ge, p eri st alt ic pu mp o r a chromatography system. 3. Operation Buff er preparation Wate r and c hem ica ls us ed fo r buf fe r pre par at ion s hou ld be o f hig h pur ity .
p. 10 Ta b l e 4 . Prep ack ed col umn s for d esa lt ing a nd bu f fer e xcha ng e. Code No Column Loading volume Elution volume Comments Application 17 - 1408 -01 Hi T rap 0.1– 1. 5 ml 1. 3– 4.0 m l Pr epa cke d wit h For de sa lti ng an d bu f fer De sal ti ng Se pha de x™ G-25 exch ang e of p rote in Super f ine.
p. 11 Purifi cation 1. Fi ll th e syr ing e or p ump tu bin g wi th s tar t b uf fer ( lo w io nic s tre ngt h ). Rem ove t he s top per a nd co nne ct t he co lum n to th e syr ing e ( wit h th e pro vid ed a dapt or) , “dro p to dro p” to av oid i ntr odu ct ing a ir in to th e colum n.
p. 12 Note: If a P1-pu mp is u sed a m ax f lo w rat e of 1 –3 ml/m in ca n be r un on a Hi T r ap 1 ml co lu mn pa cked w it h Sep har ose H igh P er for ma nce media.
p. 13 Further optimization Th e reco mme nd ati ons g ive n abo ve wi ll gi ve a sou nd b asi s for de vel opi ng a n ef f ici ent p uri f ica tio n st ep.
p. 14 Elution with stepwise ionic strength gradients Step wi se el uti on i s the s equ ent ia l use o f the s ame b uf fe r at di f fere nt io nic st ren gt hs. I t is te chn ical ly si mpl e and f as t, an d is su ita ble f or syr in ge op era tio n.
p. 15 – A p eri st alt ic pu mp an d a gra die nt mix er e.g . pu mp P- 1, gra die nt mix er GM- 1 . – A o ne pu mp sy ste m, e.g . ÄK T A pr ime ™ plus. – A t wo pu mp sy st em, e. g FPLC or ÄK TA. 1. Choose s tarting conditions as outlined under Optimizing star ting conditions.
p. 16 Fig 4. Bind in g cap aci ty of hu man I gG , HSA an d hum an t ran sfe rr in at d if fe rent p H´s on Hi Trap Q HP , 1 m l. 4. Ap pl y the s amp le s olu tio n to th e col umn w it h a pum p or a syr in ge, at a f low r ate e qua l to th e fl ow ra te to b e use d in t he pu rif i cat ion m et hod .
p. 1 7 7. Scaling up For q uic k scal e- up of pu ri f icat io ns ( bac k pre ssu re wil l inc rea se ), t wo o r th ree Hi T rap i on ex chan ge co lum ns of t he sa me ty pe ca n be co nne ct ed in s er ies .
p. 18 Rel ate d pro duc t s No. S upp lie d Co de No . Hi T rap I EX Se le ct ion K it 7 x 1 ml 17 - 60 02- 33 Hi T rap D es alt in g 5 x 5 ml 17 - 1408 -01 Hi T rap D es alt in g 100 x 5 m l* 11-0 00.
p. 19 Realated literature Ion Exchange Chr omatography & Chromatofocusing Handbook, Principles and Methods 1 11 - 0004-21 Io n Exc han ge Co lu mns a nd Me di a, Sel ec ti on Gu ide 1 18 - 1127 -3.
HiTrap, Sepharose, Sephadex, FPLC, ÄKT A , ÄKT Aprime, ÄKTAdesign, Dr op Design, NICK, NAP , HiPrep and HiLoad are trademarks of GE Healthcare companies.
Ein wichtiger Punkt beim Kauf des Geräts GE SP HP (oder sogar vor seinem Kauf) ist das durchlesen seiner Bedienungsanleitung. Dies sollten wir wegen ein paar einfacher Gründe machen:
Wenn Sie GE SP HP noch nicht gekauft haben, ist jetzt ein guter Moment, um sich mit den grundliegenden Daten des Produkts bekannt zu machen. Schauen Sie zuerst die ersten Seiten der Anleitung durch, die Sie oben finden. Dort finden Sie die wichtigsten technischen Daten für GE SP HP - auf diese Weise prüfen Sie, ob das Gerät Ihren Wünschen entspricht. Wenn Sie tiefer in die Benutzeranleitung von GE SP HP reinschauen, lernen Sie alle zugänglichen Produktfunktionen kennen, sowie erhalten Informationen über die Nutzung. Die Informationen, die Sie über GE SP HP erhalten, werden Ihnen bestimmt bei der Kaufentscheidung helfen.
Wenn Sie aber schon GE SP HP besitzen, und noch keine Gelegenheit dazu hatten, die Bedienungsanleitung zu lesen, sollten Sie es aufgrund der oben beschriebenen Gründe machen. Sie erfahren dann, ob Sie die zugänglichen Funktionen richtig genutzt haben, aber auch, ob Sie keine Fehler begangen haben, die den Nutzungszeitraum von GE SP HP verkürzen könnten.
Jedoch ist die eine der wichtigsten Rollen, die eine Bedienungsanleitung für den Nutzer spielt, die Hilfe bei der Lösung von Problemen mit GE SP HP. Sie finden dort fast immer Troubleshooting, also die am häufigsten auftauchenden Störungen und Mängel bei GE SP HP gemeinsam mit Hinweisen bezüglich der Arten ihrer Lösung. Sogar wenn es Ihnen nicht gelingen sollte das Problem alleine zu bewältigen, die Anleitung zeigt Ihnen die weitere Vorgehensweise – den Kontakt zur Kundenberatung oder dem naheliegenden Service.
